皮膚是人 體 最 大 的 器 官，是人體最外層的屏障， 皮膚屏障功能 完 好 對 維 持 機 體 的 健 康 具 有 十 分 重 要 的作用。既往研究發(fā)現(xiàn)，核激素受體可調(diào)節(jié)細胞的增 殖、分化和凋亡，在 皮 膚 的 發(fā) 育 過 程 中 發(fā) 揮 著 重 要 的 作用。目前在皮膚科臨床治療中運用最多、研究最 深入的核激素受體是糖皮質(zhì)激素受體、維甲酸受體和 維生素 Ｄ受體及其相關(guān)配體。隨著 新 的 核 激 素 受 體 不斷涌現(xiàn)，核激素受體家族成員與皮膚之間的相互作 用值得進一步探討。

１ 材料與方法

１．１ 材料

人皮 膚 ＫＣ 和人 真 皮 ＦＢ 均購 自 美 國 組 織培養(yǎng)庫（ＡＴＣＣ）。

１．２ 儀器與試劑

高級光學(xué)顯微鏡（日 本 Ｏｌｙｍｐｕｓ 公司），ＰＣＲ反應(yīng)擴增儀（美國 Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司），熒光定 量ＰＣＲ系統(tǒng)（美國 ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司），微量紫 外分光 光 度 計（美 國 Ｔｈｅｒｍｏ公司）。細胞 培 養(yǎng)：ＫＣ 培養(yǎng)基，ＦＢ 培養(yǎng) 基，胰 蛋 白 酶 終 止 緩 沖 液（ＡＴＣＣ）， ＤＰＢＳ緩沖液（美國 Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），青霉素－鏈霉素溶 液（美國Ｃｅｌｌｇｒｏ公司），胰蛋白酶（美國 Ｒｏｃｈｅ公司）。ＰＣＲａｒｒａｙ：ＲＮｅａｓｙＭｉｎｉ試劑盒、ＲＴ２ＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄ試 劑盒、ＲＴ２ ＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ、ＲＴ２ Ｐｒｏｆｉ－ ｌｅｒＰＣＲａｒｒａｙｐｌａｔｅ（美國 Ｑｉａｇｅｎ公司）。

１．３ 方法

１．３．１ 細胞培養(yǎng)

３７ ℃、含５％ ＣＯ２ 的細胞培養(yǎng)箱(一恒MJ-150-I霉菌培養(yǎng)箱)中，用各自專用培養(yǎng)基對細胞進行培養(yǎng)。

１．３．２ 細胞 ＲＮＡ 的提取

分別提取培養(yǎng)好的 ＫＣ、 ＦＢ的 ＲＮＡ。分別 檢 測 兩 種 ＲＮＡ 標(biāo) 本 的 純 度 和 濃 度，每種細胞３個 復(fù) 孔。ＲＮＡ 提取過程中所使用的 容器和 移 液 吸 頭 均 為 ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ配 置 并 嚴 格 按 照 ＲＮｅａｓｙＭｉｎｉＫｉｔ說明書要求進行操作。

１．３．３ ＰＣＲａｒｒａｙ檢測

按 ＲＴ２ ＰｒｏｆｉｌｅｒＰＣＲａｒｒａｙ ｐｌａｔｅ試劑盒的操作說明，配置對應(yīng)的反應(yīng)體系。擴增 條件為：９５ ℃預(yù)變性１０ｍｉｎ，９５℃１５ｓ，６０℃１ｍｉｎ， 共４５個循環(huán)。

１．４ 統(tǒng)計學(xué)處理

采用２－ΔΔＣｔ法對實驗所得的計量 資料進行分析。采用 ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ軟件 對 不 同 組 別的數(shù)據(jù)進行歸類整理后進行統(tǒng)計學(xué)分析。

２ 結(jié) 果

在 ＫＣ和 ＦＢ中，核激素受體有大量的表達。大部分核激素受體在人 ＫＣ中的表達水平比在ＦＢ 中高。除經(jīng)典的 糖 皮 質(zhì) 激 素 受 體（ＧＲ）以外，表 達 較 高的 核 激 素 受 體 主 要 集 中 在 ＲＸＲ 二 聚 體 家 族，如 ＶＤＲ、ＲＸＲｓ、ＰＰＡＲｓ、ＬＸＲβ 和 ＴＲｓ等，且部 分受體 如 ＶＤＲ、ＲＸＲｓ、ＰＰＡＲｓ的表 達 明 顯 高 于 ＧＲ 的表達。此外，還有一些孤兒受體如 ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ１Ｄ２、 ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２ 等的表達也很高。研究 也 發(fā) 現(xiàn)，在皮膚主要構(gòu)成細胞中，存 在 ＲＸＲα、 ＲＸＲβ、ＲＡＲα 和 ＲＡＲγ 表達，但以 ＲＸＲα 和 ＲＡＲγ 表 達為主，是皮膚中的優(yōu)勢表達亞型。ＲＡＲ 和 ＲＸＲ 各 亞型之間具有各自特異性的配體，且和各配體的親和 力不同。其作用的大小取決于受體的分布量，輔助因 子的性質(zhì)和數(shù) 量 及 維 甲 酸 受 體 選 擇 性 激 動 劑 和 拮 抗 劑的相互作用。部分患者使用維甲酸類藥物時，皮 膚會出現(xiàn)紅斑、脫 屑、干 燥、燒 灼 等 典 型 的 不 良 反 應(yīng)， 這些皮 膚 刺 激 反 應(yīng) 與 維 甲 酸 受 體 ＲＡＲα、ＲＡＲβ、 ＲＡＲγ 的高表達和被激活密切相關(guān)。表皮是脂質(zhì)代謝活躍的部位，本研究發(fā)現(xiàn)在皮膚 主要構(gòu)成細胞中，核激素受體 ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ 兩種亞 型均有表達，其中 ＰＰＡＲδ 的表達水平最高，是優(yōu)勢表 達亞型。既 往 研 究 發(fā) 現(xiàn)，激 活 ＰＰＡＲｓ可誘 導(dǎo) ＫＣ 分 化。受體激活可誘導(dǎo)表皮脂質(zhì)合成，促進板層小體的 形成和分泌，增加角質(zhì)層內(nèi)脂質(zhì)處理必需酶的活性， 誘導(dǎo)板層膜的形成，從而改善皮膚屏障功能。

３ 討 論 　　

在調(diào)節(jié)皮膚細胞功能和動態(tài)平衡的過程中，核激 素受體發(fā)揮著十分重要的作用，其中糖皮質(zhì)激素與細 胞中的 ＧＲ 結(jié) 合 以 后，在炎癥性皮膚病中發(fā)揮著抗 炎、免疫抑制、抗細胞增殖等生物學(xué)作用。但由于 ＧＲ 靶向治療的配體特異性較弱，長期系統(tǒng)使用會導(dǎo)致高 血壓、骨質(zhì)疏松 等 不 良 反 應(yīng)；長 期 局 部 使 用 可 導(dǎo) 致 皮 膚萎縮、類 固 醇 性 痤 瘡、毛細血管擴張等不良反應(yīng)。 因此，在一定程度上限制了糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用。目 前，尋找不良反應(yīng)更小的靶向治療配體或其他核激素 受體的靶向藥物已經(jīng)成為研究的熱點。



 

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