實 驗

培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、抗生素檢定培養(yǎng)基 II （北京陸橋技術(shù)有限責任公司）。 儀器設(shè)備：生化培養(yǎng)箱 36± 1 ℃（BINDER），生物 安全柜（ESCO）光度計 450 nm（賽默飛），pH 計(梅特 勒-托利多儀器有限公司)，移液器(Thermo)，電子天 平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，恒溫水浴鍋（上海一恒），游標卡尺，牛津杯，培養(yǎng)皿，離心管，陶瓦蓋。試劑：三級水，實驗室自制；生理鹽水（分析純）， 天津市大茂化學(xué)試劑廠；磷酸鹽緩沖液，北京陸橋技 術(shù)有限責任公司。 實驗菌種：藤黃微球菌（Micrococcus luteus）CMCC （B）28001第二代，CICC 10445第二代。 標準品：青霉素標準溶液（Dr）、β-內(nèi)酰胺酶標準 溶液（SIGMA、中國食品藥品檢定研究院）、舒巴坦標 準溶液（Dr）。

結(jié)果與分析

采用不同來源標準菌株。藤黃微球菌（Micrococcus luteus）CMCC（B）28001第二代菌36±1 ℃培養(yǎng)20~24 h 菌落大，菌苔厚，利于制備菌懸液。CICC 10445第二 代菌株生長較慢，36± 1 ℃ 培養(yǎng) 18~20 h 菌苔較小、透 明且薄，不利于菌懸液制備，若使用CICC 10445作為 實驗菌株最好選用活化培養(yǎng)22~24 h的菌苔制備菌懸液。檢出限為4 U/mL，采用品牌1可滿足方 法要求，但有 72%概率出現(xiàn)假陽性，會造成資源浪費； 品牌2可滿足方法要求；品牌3 不能滿足方法要求，有 16%的漏檢概率。采用不同品牌β-內(nèi)酰胺酶標準品 對實驗結(jié)果的準確性有影響。用杯碟法檢測β-內(nèi)酰胺酶，主要是利用舒巴坦特 異性抑制β-內(nèi)酰胺酶的活性，并加入青霉素作為對 照，通過比對抑菌圈的大小來間接測定樣品中有無含 有β-內(nèi)酰胺酶類藥物。試驗中菌株、β-內(nèi)酰胺酶、 青霉素等是試驗中應(yīng)注意的關(guān)鍵因素，把控其最優(yōu)條 件有利于提高試驗的準確性。

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